您好,欢迎光临凡科维商城!
 
  详细内容
常见的离心方法有哪些?
文章来源:凡科维商城   添加时间:2021/5/18 14:05:10 点击率:2156

    在进行ELISA实验之前,用来检测的样本一般都会要求离心,比如:全血离心取血清或者血浆,组织要匀浆离心取上清,尿液样本离心取上清,其他相关液体样本都有离心取上清。那么问题来了,您是否已经掌握好样本离心的方法了呢?接下来就给大家介绍一下常见的一些离心方法。
    一、差速离心法
    它利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。操作过程中一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开,然后将上清液加高转速离心,分离出第二部分沉淀,如此往复加高转速,逐级分离出所需要的物质。
    差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前的粗制品提取。
    二、速率区带离心法
    速率区带离心法是在离心前于离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等),待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心。离心后在近旋转轴处(X 1)的介质密度最小,离旋转轴最远处(X 2)介质的密度最大,但最大介质密度必须小于样品中粒子的最小密度,即ρP >ρm 。这种方法是根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带,达到彼此分离的目的。梯度液在离心过程中以及离心完毕后,取样时起着支持介质和稳定剂的作用,避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。
    由于ρP >ρm 可知S>0,因此该离心法的离心时间要严格控制,既有足够的时间使各种粒子在介质梯度中形成区带,又要控制在任一粒子达到沉淀前。如果离心时间过长,所有的样品可全部到达离心管底部;离心时间不足,样品还没有分离。由于此法是一种不完全的沉降,沉降受物质本身大小的影响较大,一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。常用的梯度液有Ficoll、Percoll及蔗糖。
    三、等密度离心法
    等密度离心法是在离心前预先配制介质的密度梯度,此种密度梯度液包含了被分离样品中所有粒子的密度,待分离的样品铺在梯度液顶上或和梯度液先混合,离心开始后,当梯度液由于离心力的作用逐渐形成底浓而管顶稀的密度梯度,与此同时,原来分布均匀的粒子也发生重新分布。当管底介质的密度大于粒子的密度,即ρm >ρP 时粒子上浮;在弯顶处ρP >ρm 时,则粒子沉降,最后粒子进入到一个它本身的密度位置即ρP =ρm ,此时dx/dt为零粒子不再移动,粒子形成纯组份的区带,与样品粒子的密度有关,而与粒子的大小和其他参数无关,因此只要转速、温度不变,则延长离心时间也不能改变这些粒子的成带位置。
    以上就是常见的离心方法,在进行ELISA实验之前,检测样本的离心是非常必要的,掌握了这些常见的离心方法,有利于ELISA实验的顺利开展。

上一条新闻:ELISA实验中不容忽视的细节盘点      下一条新闻:ELISA实验之优化包被的方法      

地址:上海市金山区枫泾镇泾商路99弄3028号305室 手机:15902171509 邮箱:2132911152@qq.com CopyRight @ www.shfksc.com
凡科维商城 .All Rights Reserved 备案号:沪ICP备09008967号-34 网站地图