Top1：标曲显色过强无明显梯度
1、主要怀疑点：洗板不充分：
1.1、机器洗版：确保机器设置的针头能吸干孔中液体，并且加液针头能加液大于350ul，加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。
1.2、手动洗板，严格按照步骤，使用干净灭菌的枪头和加样槽，使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液，静置90秒，在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。
1.3、特别注意，在加入TMB前的洗板步骤极其重要，残留的HRP酶会直接导致TMB显色。
2、次要怀疑点：
2.1、TMB 已经污染，检测TMB是否透明无色，如果偏蓝就是污染了。
2.2、检查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是双蒸水，三蒸水或无离子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属，以及HClO都会氧化TMB。
2.3、酶标板受潮，长霉，或者试剂过期。
2.4、环境污染，空气中有导致显色的物质或者粉尘。
Top2：显色较弱或不显色，没有说明书提供的数据阳性强
可能原因分析：
1、检查标准品是否受潮或者拿错
2、检查试剂是否按照说明书中要求的保存条件保存，特别是浓缩检测抗体和浓缩SABC， 如果放在-20度，融化后会严重影响其活性。
3、移液器是否校准，可以用去离子水较准移液器，1000ul=1.0g 100ul=0.1g 10ul=10mg
4、37度培养箱是否校准温度（建议用水银温度计放入水杯中，平衡12小时以上进行测量）。
5、SABC工作液和TMB在孵育前进行37度平衡半小时。
6、未严格按照说明书纸质版提供的方法操作。
7、试剂盒过期。
Top3：复孔做的不好，CV值差异大
可能原因分析：
1、复孔OD450数值在0.5-2.5之间计算的偏差相对较小，小于0.5会由于操作误差导致计算的CV值偏高，复孔样品数量在5-10个最佳。
2、操作时按照标准动作进行加样，比如要求枪头不能碰触到孔壁内侧和底面，枪头尖部的残留液体可以触碰到液面，使之流入样品孔。
3、加样尽量快速准确，不要产生气泡。
4、样品需要做预实验，使用不同浓度进行测试，找到最佳稀释比。错误的稀释比会导致复孔误差大
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