按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
ELISA试剂盒的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。 一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。
ELISA试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，ELISA检测试剂盒珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用。
可用作ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份。ELISA试剂盒有些标本可直接进行测定（如血清 、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。
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